Uzorak također možete odsoliti ultrafiltracijom do 1 desetine prethodnog volumena, koji se ponovno razrijedi i ponovi korak UF. Najbolja metoda za odsoljavanje je odsoljavanje gel filtracijom protiv 50 mM pufera, nego ultrafiltracija (klasična, ne centrifugalna).
Što je odsoljavanje u pročišćavanju proteina?
Odsoljavanje se koristi za uklanjanje soli iz proteinskih otopina, fenol ili neugrađeni nukleotidi iz nukleinskih kiselina ili višak reagensa za umrežavanje ili označavanje iz konjugiranih proteina.
Kako pročišćavate proteine?
U masovnom pročišćavanju proteina, uobičajen prvi korak za izolaciju proteina je precipitacija s amonijevim sulfatom (NH4) 2SO4. To se izvodi dodavanjem sve veće količine amonijevog sulfata i prikupljanjem različitih frakcija istaloženog proteina. Nakon toga, amonijev sulfat se može ukloniti dijalizom.
Kako vršite pufer razmjenu proteina?
Izmjena pufera se, međutim, izvodi prvim ekvilibriranjem sa smolom kolone s puferom u kojem bi uzorak trebao završiti. U oba slučaja, sastojci pufera koji nose uzorak u stupac će biti zamijenjen otopinom s kojom je kolona prethodno uravnotežena.
Koja se od sljedećih tehnika kromatografije može primijeniti za odsoljavanje proteina?
Kao što je gore spomenuto, gel filtracija može se učinkovito iskoristiti za proteineodsoljavanje i postiže se tako da se prvo ekvilibrira kolona za gel filtraciju s vodom. Međutim, izmjena pufera se postiže tako da se prvo uravnoteži smola stupca s ciljnim puferom.
