Kada se stanice pokažu odvojene, dodajte 2 volumena prethodno zagrijanog kompletnog medija za rast da deaktivirate tripsin. Nježno raspršite medij pipetiranjem preko površine staničnog sloja nekoliko puta kako biste osigurali oporavak >95% stanica.
Kako mogu zaustaviti aktivnost tripsina?
Probava tripsina može se zaustaviti zamrzavanje ili snižavanjem pH reakcije ispod pH 4 dodavanjem mravlje, octene ili trifluoroctene kiseline (tripsin će povratiti aktivnost kada pH je povišen iznad pH 4). Probavljeni uzorci mogu se čuvati na -20°C.
Što neutralizira tripsin?
Pufer koji sadrži ione kalcija i magnezija također će usporiti aktivnost tripsina. FBS je međutim učinkovitiji način za inhibiciju aktivnosti tripsina.
Da li serum inaktivira tripsin?
Serum inaktivira preostali tripsin koji ostaje od enzimske probave bubrega i proteolitičkih enzima koje sintetiziraju stanice. Svježe tripsinizirane stanice mogu se uzgajati u monoslojeve u odsutnosti seruma pod uvjetom da su više puta isprane kako bi se uklonio ostatak tripsina.
Koliko medija je potrebno za deaktivaciju tripsina?
Sve dok koristite najmanje 1:1 omjer 5-10% seruma medij koji sadrži s vašim tripsinom, trebalo bi biti više nego dovoljno inhibicije, nakon čega slijedi centrifugiranje i srednja zamjena sa svježim medijem.
