Prije svega, i EcoR1 i Xba1 ostavljaju 5' prevjesa kada probavljaju DNK (kao i Nde1). U oba slučaja 3' kraj je uvučen zbog čega poliermaza može dodati baze. Drugo, sve polimeraze mogu dodati baze samo na kraj od 3', tako da će Klenow dodati 4 baze na povučeni 3' kraj oba mjesta za stvaranje tupih krajeva.
Ostavljaju li restrikcijski enzimi 5 fosfata?
Vektori i umetci probavljeni restrikcijskim enzimima sadrže potrebne terminalne modifikacije (5' fosfat i 3' hidroksil), dok fragmenti stvoreni lančanom reakcijom polimeraze (PCR) možda ne.
Mogu li se tupi krajevi vezati?
Podvezivanje tupog kraja
Podvezivanje tupog kraja ne uključuje uparivanje baza izbočenih krajeva, tako da bilo koji tupi kraj može biti podvezan za drugi tupi kraj. Tupi krajevi mogu biti generirani restrikcijskim enzimima kao što su SmaI i EcoRV.
Da li Taq polimeraza proizvodi tupe vrhove?
Da… Taq Polymerase dodaje A-prepuste ako zadržite završni korak proširenja na 72 dC na PCR-u. Uglavnom se koristi za TA kloniranje.
Zašto koristiti Klenow fragment u DNK sekvenciranju?
Klenow fragment iznimno je koristan za zadatke temeljene na istraživanju kao što su: Sinteza dvolančane DNA iz jednolančanih šablona . Popunjavanje odmaknutih 3' krajeva DNK fragmenata kako bi prevjes od 5' bio tupi . Probavljanje izbočenih 3' prevjesa.
