Tripsinizacija je proces disocijacije stanica korištenjem tripsina, proteolitičkog enzima koji razgrađuje proteine, kako bi se odvojile adherentne stanice iz posude u kojoj se uzgajaju. Kada se doda u staničnu kulturu, tripsin razgrađuje proteine koji omogućavaju stanicama da prianjaju na žilu.
Zašto tripsiniziramo stanice?
Tripsinizacija se često radi kako bi se dopustio prolaz stanica u novi spremnik, promatranje radi eksperimentiranja ili smanjenje stupnja konfluencije u tikvici uklanjanjem postotka ćelije.
Kako tripsin radi na odvajanju stanica?
Tripsin/EDTA je kombinirana metoda za odvajanje stanica. Tripsin reže adhezijske proteine u interakcijama stanica-stanica i stanica-matriks rezanjem aminokiseline adhezijskih proteina posebno na lizinu ili agininu na C-terminalu ako uzvodna aminokiselina nije prolin.
Kako dobiti tripsinizirane adherentne stanice?
Procedura
- Uklonite medij iz posude za kulturu aspiracijom i isperite monosloj otopinom soli bez Ca2+ i Mg 2+ za uklanjanje svih tragova seruma. …
- Dozirajte dovoljno tripsina ili otopine tripsina/EDTA u posude za kulturu da potpuno prekrije monosloj stanica i stavite u inkubator na 37 °C na ~2 minute.
Kako da onemogućim tripsin u staničnoj kulturi?
Kada se ćelije pojave odvojene, dodajte 2 sveskaprethodno zagrijanog kompletnog medija za rast da se deaktiviratripsin. Nježno raspršite medij pipetiranjem preko površine staničnog sloja nekoliko puta kako biste osigurali oporavak >95% stanica. Za kulture bez seruma, inhibitor sojinog tripsina (Br. proizvoda
